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遺伝子改変マウス作製受託

ゲノム編集技術(CRISPR/Cas9)

TOPICS・キャンペーン情報

  • 2020/09/14
    【新型コロナ対策支援】ゲノム編集技術(CRISPR/Cas9)による遺伝子改変マウス作製について、期間限定キャンペーン(9/14~11/30)を行います。
  • 2020/09/02
    遺伝子改変マウスの作製受託 ゲノム編集技術(CRISPR/Cas9)ページを更新しました。
  • 2015/04/21
    米国Broad研究所より、ゲノム編集技術(CRISPR/Cas9)に関する 特許群の非独占実施許諾を取得しました
  • 2014/09/29
    『ゲノム編集技術(CRISPR/Cas9)を用いた遺伝子改変マウス』作製受託サービスを開始しました
キャンペーン

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概要

概要

トランスジェニック社では、ゲノム編集技術(CRISPR/Cas9)による遺伝子改変マウスの作製受託サービスを提供しております。
標的遺伝子に対するguide RNAとCas9タンパク質の複合体(RNP complex)が認識する guide sequenceの候補配列を決定し、決定したデザインとguide sequenceに基づき、crRNAを合成します。合成したcrRNAと、準備したtracrRNA、Cas9タンパク質、PCR増幅したTarget領域を用いて、in vitroでの活性評価確認を行い、受精卵へのインジェクションを行います。CRISPR/Cas9での変異導入効率は高頻度であり、テンプレートDNAとなるdonor DNAや相同組換えベクターを一緒にインジェクションすることにより、相同組換えによる任意の配列の挿入が可能です。

特徴

 ・Broad研究所(CRISPR/Cas9における特許群)および国立大学法人東京医科歯科大学(高効率CRISPR/Cas9ノックイン法)より
  ライセンス許諾を受けてサービスを実施しております。
 ・guide RNA設計からマウス作製まで、トータルサービスを提供いたします。一部工程のみの受託も承ります。
 ・ES細胞を用いた相同組換え法との組み合わせも実施いたします。
 ・研究の目的に応じたストラテジーを相談させていただきます。標的遺伝子によっては、本手法での実施が適さない場合は、
  別のマウス作製方法を提案させていただきます。

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CRISPR/Cas9の原理

CRISPR/Cas9の原理

ゲノム編集(CRISPR/Cas9)の原理
 ゲノム編集の基本原理は、任意の標的ゲノム部位にDNA二本鎖切断(double-strand break: DSB)を誘導し、その後切断されたDNA末端が細胞の持つDNA修復機構により修復される際に、塩基の欠損や挿入が起こるものである。
非相同末端結合(non-homologous end-joining: NHEJ)による修復は、塩基欠損や挿入が高頻度で起こる。そのため、DNA二本鎖切断がタンパク質コード領域に起これば、フレームシフトによるストップコドン生成が期待される。
一方、相同末端結合による修復は、テンプレートDNAに基づき、正確に修復する相同組換え(homology-directed repair: HDR)である。
そのため、テンプレートDNAとなる donor DNA(二本鎖DNA, ssODNs等)を外部から供給することで、任意の塩基置換や外来遺伝子を切断部位近傍に正確にノックインすることが可能である。

RNP(Ribonucleoprotein) インジェクション
 Cas9タンパクと、crRNA、tracrRNAを準備し、RNP (Ribonucleoprotein)複合体を作製した後、インジェクションを行う。RNAとタンパク質を細胞にインジェクションすることにより、細胞導入直後からDNA切断活性による標的部位の切断が期待される。またRNPは分解されやすいため、off-targetの切断可能性が軽減されることが期待される。


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作業価格と標準価格(例:Point Mutation導入の場合)

工程 作業内容 納期 価格(税別)
1. guide RNA設計と活性確認 標的遺伝子に対してguide RNAを設計し、in vitroでの切断活性評価を行います。 約1~2ヶ月 550,000円
2. 受精卵インジェクション(C57BL/6N) 受精卵(C57BL/6系統)200個を用いて、インジェクションを実施いたします。 約3ヶ月 700,000円
3. ファウンダーマウスの導入変異解析 ダイレクトシークエンスによる導入変異の解析をいたします。
(産子のうち、♂を優先して30匹を上限とします)
約1ヶ月 400,000円
合計   約5~6ヶ月 1,650,000円

※ 解析の結果、ファウンダーマウスが得られなかった場合、3.の費用はご請求いたしません。
※ マウス系統、インジェクション数により価格は異なります。
※ マウスの輸送費・微生物検査費は、別途申し受けます。

作業価格(オプション工程)

工程 作業内容 納期 価格(税別)
自然交配による次世代マウスの作製 ファウンダー(F0)マウスと野生型マウスとの自然交配により、次世代マウスを作製します。産子について、ダイレクトシーケンスによる導入変異の解析をいたします。 約3ヶ月 応相談

実施例

(1)終止コドン挿入によるノックアウト
(2)点変異導入によるノックイン
(3)2か所切断による欠失
 など、各種目的に応じたストラテジー相談から承ります。

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ライセンス状況

当社は、2015年4月21日に米国Broad研究所からCRISPR/Cas9に関する特許群(US8,697,359B1他)の日本国内における非独占的実施権を取得しております。(参考: ゲノム編集技術(CRISPR/Cas9)に関する非独占ライセンス契約締結のお知らせ
また、国立大学法人東京医科歯科大学より高効率 CRISPR/Cas9 ノックイン法に関する特許の日本国内での非独占的使用権許諾を受けております。(参考: 高効率 CRISPR/Cas9 ノックイン法に関する 非独占ライセンス契約締結のお知らせ
当社で受託作製した遺伝子組換えマウスは、お客様の機関内における研究目的での使用が認められています。作製した遺伝子改変マウス自体を商用利用する場合は、別途米国Broad研究所にご相談ください。
※作製費用にはBroad 研究所および東京医科歯科大学へのライセンス料を含みます。

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